ELISA试剂盒

       ELISA试剂盒安全性：

　　1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

　　2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

　　3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

　　4．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

　　5．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

　　6．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

　　7．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

　　8．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　9．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

　　10．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

　　11．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

　　12．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

　　人白细胞介素28（ELISA）试剂盒

　　实验条件的选择

　　在ELISA试剂盒中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

　　（1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

　　（3）酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

　　（4）酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。