大鼠Ⅱ型胶原抗体 （ELISA）试剂盒

大鼠Ⅱ型胶原抗体 （ELISA）试剂盒

主要设备

试剂

（1）　包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:

Na2CO3 1.59克

NaHCO3　 2.93克

加蒸馏水至1000ml

（2）　洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M

KH2PO4 　0.2克

Na2HPO4·12H2O　2.9克

NaCl　8.0克

KCl　0.2克

Tween-20　0.05%　0.5ml

加蒸馏水至1000ml

（3）　稀释液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

加洗涤缓冲液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。

（4）　终止液（3M　H2SO4）：

蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。

（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:

0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml

0.1M柠檬酸（19.2克/L）　 24.3ml

加蒸馏水50ml。

（6）　TMB（四甲基联苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml

底物缓冲液（PH5.5）　 10ml

0.75%H2O2　 　32μl

（7）　ABTS使用液:

ABTS　0.5mg

底物缓冲液（PH5.5）　 1ml

3%H2O2　 　2μl

（8）　抗原、抗体和酶标记抗体。

（9）　正常人血清和阳性对照血清。

利用

ELISA的基础是抗原或抗体的固定化和抗原或抗体的酶标记。固相载体表面结合的抗原或抗体仍保留其免疫活性，而酶标抗原或抗体同时保留其免疫活性和酶活性。在测量过程中，测试样品（其中的抗体或抗原）与固体支持物表面的抗原或抗体发生反应。在固相载体上形成的抗原抗体复合物通过洗涤与液体中的其他物质分离。然后加入酶标抗原或抗体，也通过反应与固相载体结合。此时，固相上酶的量与样品中被测物质的量成正比。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成有色产物，产物的多少与样品中被测物质的多少直接相关，因此可以进行定性或定量分析根据颜色深度。由于酶的高催化效率，间接放大了免疫反应的结果，并且该测定方法达到了高灵敏度。 ELISA 可用于测量抗原和抗体。

组成结构

1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测

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