大鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原 （ELISA）试剂盒

大鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原 （ELISA）试剂盒

ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。

ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。

利用

ELISA的基础是抗原或抗体的固定化和抗原或抗体的酶标记。固相载体表面结合的抗原或抗体仍保留其免疫活性，而酶标抗原或抗体同时保留其免疫活性和酶活性。在测量过程中，测试样品（其中的抗体或抗原）与固体支持物表面的抗原或抗体发生反应。在固相载体上形成的抗原抗体复合物通过洗涤与液体中的其他物质分离。然后加入酶标抗原或抗体，也通过反应与固相载体结合。此时，固相上酶的量与样品中被测物质的量成正比。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成有色产物，产物的多少与样品中被测物质的多少直接相关，因此可以进行定性或定量分析根据颜色深度。由于酶的高催化效率，间接放大了免疫反应的结果，并且该测定方法达到了高灵敏度。 ELISA 可用于测量抗原和抗体。

怎么做

双抗体夹心法

1. 包被：以 0.05MPH 稀释抗体至蛋白质含量为 1-10 μg/ml。 9. 含氧碳酸盐涂层缓冲液。向每个聚苯乙烯板的反应孔中加入 0.1 ml，并在 4 °C 下孵育过夜。次日，弃孔中的溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，每次3分钟。 （简称洗涤，下同）。

2、加样：将0.1ml稀释后的待测样品加入上述包被的反应孔中，37℃孵育1小时。然后洗。 （同时制作空白孔、阴性对照孔和阳性对照孔）。

3、加入酶标抗体：在每个反应孔中加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体（滴定后稀释）。在 37°C 下孵育 0.5 至 1 小时并洗涤。

4 加入底物显色液：在每个反应孔中加入 0.1 ml 临时配制的 TMB 底物溶液，37°C 孵育 10-30 分钟。

5. 反应终止：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸。

6、结果判断：在白色背景下，肉眼可直接观察结果：反应孔颜色越深，阳性程度越强，阴性反应无色或极浅。 “-"符号表示。 OD值也可以测量：在ELISA检测器上，在450nm（ABTS显色时为410nm），用空白对照孔调零后测量各孔OD值，如果大于2.1倍阴性对照的OD值，即阳性。

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