大鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽 （ELISA）试剂盒

 ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。

  ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。

用途

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

如何操作

双抗体夹心法

1. 包被：用 0.05MPH 稀释抗体至 1-10 μg/ml 的蛋白质含量。 9. Oxycarbonate 包被缓冲液。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加入 0.1 ml，在 4°C 下过夜。次日，弃孔中的溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，每次3分钟。 （简称洗涤，下同）。

2、加样：将0.1ml稀释的待测样品加入上述包被的反应孔中，37℃孵育1小时。然后洗。 （同时制作空白孔、阴性对照孔和阳性对照孔）。

3. 加入酶标抗体：每反应孔加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体（滴定后稀释）。在 37°C 下孵育 0.5 至 1 小时并洗涤。

4加入底物显色液：在每个反应孔中加入0.1ml临时配制的TMB底物溶液，37℃孵育10-30分钟。

5. 反应终止：向每个反应孔中加入 0.05ml 2M 硫酸。

6、结果判断：在白色背景下，可以用肉眼直接观察结果：反应孔颜色越深，阳性程度越强，阴性反应无色或极浅。 “-"符号表示。 OD值也可以测量：在ELISA检测器上，在450nm（ABTS用于显色时为410nm），用空白对照孔调零后测量各孔的OD值，如果大于OD值的2.1倍的阴性对照，即阳性。

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